The principle and advantages of Real-time PCR

Abstract

The article is devoted to the modern methods of molecular diagnostics — polymerase chain reaction in real time. The components, stages of this reaction, the amplification products visualization techniques and its advantages are also described. The main components of the Real-time PCR are DNA polymerase enzyme, primers, DNA template, fluorescent dye, nucleotides. The advantages of Real-time PCR include direct determination of the presence of pathogens, a high specificity, high sensitivity, universality of the various procedures to identify DNA and RNA, high speed of analysis, the possibility of the diagnostics of acute and latent infections, the possibility of preclinical and retrospective diagnostics, the ability to conduct analysis with minimal sample, the possibility of simultaneous diagnosis of several pathogens or abnormal genes in one, the possibility of research results examining; exclusion of the possibility to the personnel infection. The information about additives and enhancing agents can be included in PCR amplifications to increase yield, specificity and consistency are also given in the article. Мақала молекулалық диагностиканың заманауи əдісі — нағыз уақыттағы полимеразалы тізбекті реакцияға (ПТР) арналған. Мақалада оның компоненттері, кезеңдері, амплификация өнімдерінің визуализация əдістері жəне ПТР артықшылықтары қарастырылған. Нағыз уақыттағы ПТР-дың негізгі компоненттері болып ДНК-полимераза ферменті, праймерлер, ДНК-матрица, флуоресцентті бояғыш, дезоксирибонуклеотидтер табылады. Осы əдістің артықшылықтарына патогеннің бар болуын тікелей анықтау, арнайлылығы, сезімталдылығы, ДНК мен РНК-ны анықтау іс-шараларының əмбебаптылығы, талдаудың жылдамдылығы, жедел жəне латентті инфекцияларды анықтау мүмкіндігі, клиникаға дейін жəне ретроспективті диагностика мүмкіндігі, үлгінің минималды көлемін талдау мен бір үлгіде бір уақытта бірнеше патоген немесе аномалды генді диагностикалау мүмкіндігі, талдау нəтижелерін зерттеу мүмкіндігі, персоналға жұғу мүмкіндігінің болмауы жатады. Сонымен қатар авторлармен реакцияның шығымы, арнайлылығы мен сəйкестілігін арттыру үшін қолдануға болатын қосылыстар мен агенттер туралы мəлімет ұсынылған. Статья посвящена современному методу молекулярной диагностики — полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. Описаны компоненты, этапы, методы визуализации продуктов амплификации и ее преимущества. Выделены основные компоненты ПЦР в реальном времени — фермент ДНК-полимераза, праймеры, ДНК-матрица, флуоресцентный краситель, дезоксирибонуклеотиды. Показаны преимущества ПЦР в реальном времени — прямое определение присутствия патогена, высокая специфичность, чувствительность, универсальность процедур определения ДНК и РНК, высокая скорость анализа, а также возможность диагностики острых и латентных инфекций, доклинической и ретроспективной диагностики, возможность анализа при минимальном количестве образца, одновременной диагностики нескольких патогенов или аномальных генов в одном образце, возможность изучения результатов анализа, исключение возможности инфицирования персонала. В статье также представлена информация о соединениях и агентах, которые могут быть использованы для того, чтобы увеличить выход, специфичность и согласованность реакции.