Оптимизация duplex-ПЦР метода для выявления провируса лейкоза крупного рогатого скота

Abstract

Duplex-ПТР əдісін қою үшін ИФТ-да позитивті, «сұр», яғни күмəн тудыратын, аумақтағы жəне негативті нəтиже көрсеткен ІҚМ қанынан бөлінген ДНК-үлгілері алынды. Зерттеу нəтижесінде көрсетілгендей, əзірленген ПТР əдісі ИФТ-да кейбір позитивті, «сұр» аумақтағы жəне негативті үлгілерден ІҚМ лейкоз провирусын анықтауға мүмкіндік береді, сонымен қатар ІҚМ α-Globin генінің ішкі бақылауына сəйкес келетін ПТР-өнімдері ДНК үлгілерінен айқындалды. ІҚМ геномінде интеграцияланған провирустың геномы əр түрлі мөлшерде болуы мүмкін. Сол себепте əзірленген duplex-ПТР əдісінде ДНК-нің жəне провирустың геніне негізделген праймерлердің концентрациясы ішкі бақылау гендеріне спецификалы праймерлердің концентрациясына қарағанда жоғары болуы тиіс. For the duplex-PCR analysis we used ELISA-positives, ELISA-indeterminate and ELISA-negative DNA hosts samples that were isolated from a blood of cows. Our results showed that developed in this work duplex-PCR method may be applied to detect Bovine leukemia provirus in some ELISA-positive, ELISAindeterminate and ELISA-negatives hosts. What is more PCR-products correspondеd to internal control α-Globin gene of cattle may be amplified by the duplex-PCR method. Depend on viral DNA copy number integrated in host’s genome an increased DNA concentration in a PCR mix can be applied with increasing of concentration of pair primers that is targeted to proviral env gene in compare to pair primers are targeted to internal control gene to improve the duplex-PCR amplification.